Авг
08
Опубликовано: 08 Авг 2010
Рубрика: Болезни пчел | Автор: admin

Попытки определить количества летучих сульфидов в гнильцовых чешуйках показали, что данные соединения не являются специфичными и не могут быть использованы как индикатор американского гнильца (Т. Gochnauer, V. Margetts, 1981).

Для обнаружения возбудителя в меде предложена следующая методика. Жидкий мед в емкости предварительно тщательно перемешивают; пробы из засахаренного меда отбирают щупом с различной глубины; пробы сотового меда — вырезая небольшие участки массой по 30 г с последующим погружением меда в 15—20 мл стерильного физраствора до полного растворения его в ячейках сотов. Навеску меда 15—20 г помещают в стерильную колбочку и добавляют 15—20 мл стерильного физраствора (температура 35—40°С). Растворенный мед центрифугируют в течение 15 мин при 2000 мин"1. Недосадочную жидкость

сливают, к центрифугату снова добавляют стерильный физраствор, взбалтывают и еще раз центрифугируют. Из полученного центрифугата параллельно делают два мазка, один из которых окрашивают по Граму, другой — на споры 2%-ным раствором карболового фуксина, и высевают в мясо-пептонный сывороточный бульон. Выросшую культуру возбудителя идентифицируют согласно общепринятым бактериологическим и серологическим методами.

В тех случаях, когда из-за низкой плотности инфицирования бактериологическим методом выделить Вас. larvae из меда нельзя, применяют метод флюоресцирующих антител. Пробы меда растворяют в физрастворе и центрифугируют. Из центрифугатов делают мазки, фиксируют их в течение 15 мин этиловым спиртом, высушивают на воздухе, затем увлажняют фосфатным буфером с рН 7,4 и снова высушивают. Препараты окрашивают прямым способом. Для этого на мазок наносят кашпо флюоресцирующей антилярвейной сыворотки, помещают в чашку Петри с влажным тампоном и выдерживают при температуре 37°С 35—45 мин. Окрашенные мазки промывают вышеуказанным буферным раствором дважды через 20 мин и ополаскивают дистиллированной водой. После высушивания на мазки наносят каплю забуференного (рН 8,0) глицерина и просматривают под люминесцентным микроскопом под иммерсионной системой. Параллельно готовят мазки из чистой культуры Вас. larvae и окрашивают их антилярвейной флюоресцирующей сывороткой. Степень свечения микробных тел оценивают по 4-балльной шкале.

Для обнаружения возбудителя на искусственной вощине на складах воскозаводов из разных мест партии искусственной вощины, подозреваемой в заражении возбудителем американского гнильца пчел, отбирают 1% стандартных пачек вощины и маркируют их. При соблюдении правил стерильности непосредственно на воскозаводе вскрывают торговую упаковку и из разных мест отбирают для исследования пять листов искусственной вощины. С обеих поверхностей листов делают смывы путем тщательного протирания поверхностей листа ватно-марлевым тампоном, смоченным 50 мл стерильного физраствора. Собранную жидкость (смывы) помещают в стерильные флаконы и доставляют в ветеринарную лабораторию для исследования.